Extração e caracterização parcial de uma lectina das sementes de Camptosema rubicundum HOOK. & ARN

Abstract

As lectinas constituem um grupo de proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica que apresentam no mínimo um domínio não catalítico que reconhecem e ligam-se reversivelmente a carboidratos. Entre as características mais peculiares das lectinas estão inclusas a capacidade de aglutinar células animais e/ou células vegetais e precipitar glicoconjugados. Este trabalho objetivou a identificação e caracterização parcial de uma lectina das sementes de Camptosema rubicundum, pertencente à família das leguminosas, subfamília Papilionoideae. Após a preparação da farinha a extração da lectina foi testada em solução salina de NaCl 0,15 M, além de 3 soluções tamponadas com pH 2,6, 7,6 e 9,0 ambas contendo NaCl 0,15 M, a eficiência das soluções de extração foi testada a partir de ensaios de atividade hemaglutinante usando eritrócitos de coelho nativos e tratados com as enzimas papaína e tripsina, além de eritrócitos humanos do sistema ABO, aliado a isso foi verificado o teor de proteínas solúveis em cada extrato afim de calcular a atividade específica da lectina. A especifidade à carboidratos foi observada através do teste de inibição da hemaglutinação, ensaios estes que nortearam a técnica de isolamento da lectina, foram testadas as resinas de agarose/manose, agarose/fetuína e sephadex G-50 e G-75. A caracterização físico-química se deteve na avaliação da dependência da lectina à efeitos da temperatura e pH. A extração mais eficiente foi em NaCl 0,15 M. A lectina apresentou atividade tanto para eritrócitos de coelho quanto para eritrócitos humanos, contudo o tratamento dos eritrócitos de coelhos com enzimas proteolíticas otimizou a hemaglutinação. Além disso, a ação da lectina foi inibida pelos carboidratos manose e α-metil-D-manopiranosídeo, além da glicoproteína fetuína, entretanto a mesma não foi purificada em resinas contendo os seus inibidores. A caracterização físicoquímica da lectina revelou que a mesma é termoestável e resistente a variações de pH na faixa de 5,0 a 10. Esse trabalho permitiu a identificação de uma nova lectina das sementes de C rubicundum e estudos posteriores na busca por mais características dessa lectina podem elucidar propriedades moleculares que poderão ser utilizadas como ferramenta biotecnológica a partir da interação proteína-carboidrato em diversos modelos celulares.