O tratamento profilático com extrato padronizado de própolis de Apis melífera aumenta a expectativa de vida de camundongos com sepse experimental por modulação da resposta inflamatória

Abstract

A própolis produzida pelas abelhas Apis melífera é um material balsâmico resinoso, utilizado para a proteção da colmeia contra fungos, bactérias, vírus e insetos. Além das atividades antimicrobianas da própolis destaca-se o seu efeito antiinflamatório e imunomodulador. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito do tratamento com Extrato Padronizado de Própolis (EPP-AF®) na infecção sistêmica induzida por ligadura e perfuração cecal (CLP) e seu efeito na polarização de macrófagos peritoniais de camundongos. Inicialmente, para avaliação da sobrevida, os camundongos Swiss foram separados em 5 grupos: SHAM, que não teve o ceco perfurado, CLP (Salina+CLP), CLP+ATB (Antibiótico+CLP), EPP10 (EPP-AF® 10mg/kg+ CLP), EPP100 (EPP-AF® 100mg/kg+CLP). Todos os tratamentos foram feitos 6 horas antes do procedimento de perfuração e ligadura cecal. A sobrevida dos animais foi avaliada a cada 12 horas, durante 5 dias. Os dados demonstraram que houve um aumento de 51, 16 e 25% da expectativa de vida dos animais dos grupos CLP+ATB, EPP10 e EPP100, respectivamente, em relação ao grupo Controle. Após a avaliação da sobrevida, foram selecionados os grupos CLP e o EPP100 para avaliação de parâmetros imunofisiológicos. Após 12 horas da CLP, os animais foram eutanasiados e o material biológico foi colhido para as análises. Os dados demonstraram que o aumento da sobrevida previamente observado não foi decorrente da diminuição das unidades formadoras de colônia no peritônio e nem no sangue e pulmão uma vez que não houve diferença entre os grupos. Da mesma forma, não houve diferença na contagem de células do sangue periférico, da medula óssea e do peritônio. Também não houve diferenças no coagulograma (número de plaquetas, TTP e TTPA). Entretanto, é possível que o aumento da sobrevida seja decorrente de uma menor inflamação pulmonar uma vez que animais tratados com própolis tiveram melhor preservação do parênquima pulmonar com menos infiltrado inflamatório e menos hemorragia. Além disso, a glicemia também foi menor nos animais tratados com a própolis. Para investigar se o efeito da própolis poderia estar relacionado a uma ação moduladora na ativação de macrófagos, foi usado um ensaio in vitro usando macrófagos polarizados para os perfis M1 ou M2 de resposta. Os macrófagos foram extraídos e polarizados para macrófagos M1 com LPS 200ng/mL + IFN 10ng/mL e para macrófagos M2 com IL-4 40ng/mL e IL-13 20ng/mL. Após a polarização, o EPPAF foi adicionado na concentração de 100ug/mL. A própolis induziu a redução da produção de IL-10, MCP-1, TNF e IL-6 e o aumento de IFN-γ e IL-12, o EPPAF também reduziu a produção de NO. Em conclusão, o tratamento profilático com extrato padronizado de própolis aumenta a expectativa de vida de camundongos com sepse, muito provavelmente por sua capacidade de reduzir a inflamação pulmonar e por modular a resposta inflamatória, reduzindo citocinas inflamatórias e aumentando citocinas estimuladoras, o que poderia reverter a imunossupressão causada pela sepse, diminuindo assim a progressão deletéria da doença.