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Título: Classificação de oócitos imaturos bovinos derivados de fêmeas post-mortem pelo método Azul Cresil Brilhante (ACB)
Título(s) alternativo(s): Classification of bovine immature oocytes derived from postmortem females using the Blue Cresil Brilhante method (ACB)
Autor(es): MATOS, Cristian Jordan Bezerra
Palavras-chave: Bovino de corte
Competencia oocitária
Fertilização in vitro
Beef cattle
Oocyte competence
In vitro fertilization
Data do documento: 12-Dez-2018
Editor: Universidade Federal do Maranhão
Resumo: A competência da produção in vitro de embriões (PIV), tem sido delimitada pelas condições de cultivo in vitro e baixa eficiência da qualidade dos oócitos selecionados para etapa de maturação in vitro. A utilização do corante Azul Cresil Brilhante (ACB) junto à seleção morfológica convencional tem sido uma escolha de métodos não invasivos que buscam selecionar oócitos de maior competência. Objetivou-se com o presente estudo selecionar oócitos imaturos bovinos para a maturação in vitro (MIV) pelo método Azul Cresil Brilhante (ACB) em condições de umidade e atmosfera ambiente. O estudo foi conduzido no Laboratório de produção in vitro de embriões da Universidade Federal do Maranhão - Campus Chapadinha. Os ovários foram obtidos em abatedouro, foram puncionados folículos com diâmetro variando de 3 a 12 mm, em seguida os oócitos foram rastreados e classificados sob estereomicroscópio por critérios morfológicos em quatro graus: Grau I (três ou mais camadas de células do cumulus e citoplasma homogêneo), Grau II (uma ou duas camadas de células do cumulus e citoplasma homogêneo), Grau III (camada incompleta de células do cumulus e citoplasma homogêneo ou heterogêneo) e Grau IV (células do cumulus com aspecto gelatinoso ou oócito degenerado com grânulos escuros). Em seguida, os oócitos selecionados foram incubados em gotas de ACB diluído em PBS sobre placa aquecedora à 38ºC por 60 min. Dentro do grupo de oócitos GI, o percentual de oócitos ACB+ foi significativamente maior que o percentual de ACB-. Nos oócitos classificados morfologicamente como GII foi encontrado um maior percentual de oócitos ACB-. O percentual de ACB+ e ACB- foram similares dentro do grupo de CCOs GIII, e taxa de ACB- significativamente maior grupo GIV. Ao comparar o percentual de corados e não corados entre os graus de classificação oocitária, verificou-se a taxa de ACB+ foi significativamente maior nos graus I e III. E consequentemente os graus II e IV apresentaram maiores taxas de CCOs ACB-. Concluiu-se que o método de classificação oocitária ACB, selecionou oócitos mais competentes (ACB+) classificados em Grau 1, embora não tenha sido capaz de selecionar oócitos viáveis classificados em Grau 2.Deste modo o método de coloração ACB foi atenuado por situações adversas de temperatura e umidade.
Descrição: ABSTRACT The competence of in vitro embryo production (IVP) has been delimited by in vitro culture conditions and low efficiency of oocyte quality selected for in vitro maturation stage. The use of Blue Shining Cresil (BSC) with conventional morphological selection has been a choice of noninvasive methods that seek to select more competent oocytes. The objective of this study was to select bovine immature oocytes for in vitro maturation (IVM) using the Blue Shining Cresil Method (BSCM) under conditions of humidity and ambient atmosphere. The study was conducted at the in vitro embryo production laboratory of the Federal University of Maranhão - Chapadinha Campus. Ovaries were obtained at slaughterhouse, follicles with a diameter ranging from 3 to 12 mm were punctured, and the oocytes were then screened and stereomicroscopically classified by four-degree morphological criteria: Grade I (three or more layers of cumulus cells and homogeneous cytoplasm ), Grade II (one or two layers of cumulus cells and homogeneous cytoplasm), Grade III (incomplete layer of cumulus cells and homogeneous or heterogeneous cytoplasm), and Grade IV (cumulus cells with a gelatinous appearance or degenerated oocyte with dark granules). Then, the selected oocytes were incubated in drops of ACB diluted in PBS on hot plate at 38 ° C for 60 min. Within the group of GI oocytes, the percentage of ACB + oocytes were significantly higher than the percentage of ACB-. In oocytes classified morphologically as GII were found a higher percentage of oocytes ACB- . The percentages of ACB + and ACB were similar within the group of CIIs GIII, and rate of CBA- significantly higher GIV group. When comparing the percentage of stained and non-stained between degrees of oocyte classification, it was found that the rate of CBA + was significantly higher in grades I and III. Therefore, grades II and IV showed higher rates of ACB-CCO. It was concluded that the ACB oocyte classification method selected more competent oocytes (Grade BCA) classified in Grade 1, although it was not able to select viable oocytes classified in Grade 2. In this way the CBA coloration method was attenuated by adverse temperature and humidity.
URI: http://hdl.handle.net/123456789/3216
Aparece nas coleções:TCC de Graduação em Zootecnia do Campus de Chapadinha

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