Caracterização do perfil inflamatório do modelo tumor ascítico de Ehrlich

Abstract

Resumo: Introdução: O modelo murino do tumor ascítico de Ehrlich é muito utilizado para diversas investigações acerca do câncer, porém ainda existem lacunas sobre o padrão inflamatório a ele associado. Objetivo: Investigar o padrão inflamatório na progressão do tumor e na produção de citocinas in vivo e in vitro. Metodologia: Para o estabelecimento do modelo, um inóculo e 200µL da suspenção de células tumorais (1x107 células/mL) foi aplicada no peritônio. Os animais foram pesados ao longo de 6, 9 e 12 dias e após a eutanásia, foram determinados o volume, aspecto, a celularidade, viabilidade das células tumorais e o padrão de citocinas na ascite. No ensaio in vitro, macrófagos da linhagem RAW 264.7 foram estimulados com sobrenadante da ascite e/ou lipopolissacarídeo para a avalição da produção de citocinas e óxido nítrico. Resultados: Durante o desenvolvimento do tumor, foi observado ganho progressivo de peso dos camundongos, aumento do volume da ascite e aumento da celularidade com diminuição da viabilidade. Foi observado um aumento na produção de IL-6, com redução de IL-10 e INF- γ e manutenção dos níveis de TNF. No tratamento dos macrófagos estimulados com LPS, a ascite de 12 dias induziu uma redução na produção de IFN- e TNF nos tempos de 24 e 48h e, independentemente do tempo da ascite (6, 9 ou 12 dia), a produção de IL 6 foi diminuída em 24h, mas se manteve em 48h. Houve redução na produção de óxido nítrico nos macrófagos tratados e aumento de viabilidade em alguns grupos. Conclusão: Apesar da detecção de citocinas antitumorais na ascite, houve melhora na viabilidade das células tumorais, até o nono dia do desenvolvimento do tumor. Os resultados in vitro indicam que os macrófagos expostos ao sobrenadante tumoral perdem a capacidade de produzir citocinas importantes para combater o tumor. ___ABSTRACT: : The murine model of ascitic Ehrlich tumor is widely used for several cancer investigations, but there are still gaps about the inflammatory pattern associated with it. Objective: To investigate the inflammatory pattern in tumor progression and cytokine production in vivo and in vitro. Methodology: To establish the model, an inoculum and 200µL of tumor cell suspension (1x107 cells/mL) was applied to the peritoneum. The animals were weighed over 6, 9 and 12 days and after euthanasia, the volume, appearance, cellularity, viability of tumor cells and cytokine pattern in the ascites were determined. In the in vitro assay, macrophages of the RAW 264.7 strain were stimulated with ascites supernatant and/or lipopolysaccharide for the evaluation of cytokine and nitric oxide production. Results: During tumor development, progressive weight gain of the mice, increased ascites volume and increased cellularity with decreased viability were observed. An increase in IL-6 production was observed, with a decrease in IL-10 and INF- γ and maintenance of TNF levels. In the treatment of LPS-stimulated macrophages, 12-day ascites induced a reduction in IFN- and TNF production at 24 and 48h, and regardless of the time of ascites (6, 9 or 12 day), IL-6 production was decreased at 24h but maintained at 48h. There was a reduction in nitric oxide production in treated macrophages and increased viability in some groups. Conclusion: Despite the detection of antitumor cytokines in ascites, there was improvement in tumor cell viability by the ninth day of tumor development. The in vitro results indicate that macrophages exposed to tumor supernatant lose their ability to produce cytokines important for fighting the tumor.