Identificação molecular de espécies de Leishmania e caracterização da população infectada: um estudo na região de Pinheiro-MA

Abstract

RESUMO: A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é a forma mais comum de leishmaniose no Brasil, sendo Leishmania (Viannia) braziliensis a principal espécie causadora, com a presença adicional da espécie L. (Leishmania) amazonensis. O diagnóstico apropriado da LTA demanda a avaliação de parâmetros clínicos e epidemiológicos, seguida por ensaios laboratoriais para a confirmação. Neste contexto, as técnicas moleculares se destacam devido à sua elevada sensibilidade e especificidade. A PCR-RFLP emerge como um método preeminente no diagnóstico molecular de espécies de Leishmania, valendo-se de alvos moleculares específicos para a discriminação de espécies. Com isso, o objetivo principal desse trabalho foi determinar as espécies de Leishmania de amostras de pacientes com suspeita de LTA atendidos na Regional de Saúde de Pinheiro/MA, bem como realizar a caracterização clínico epidemiológica da população estudada através de análise comparativa dos dados qualitativos (sexo, idade, escolaridade, entre outros) e dos dados de distribuição geográfica de todas as espécies de Leishmania identificadas no estudo para determinar os casos autóctones e importados. Ademais, também foi avaliada a correlação entre a técnica molecular (PCR) utilizada e o teste parasitológico direto, considerado o padrão ouro. A PCR da região do espaçador transcrito interno-1 (ITS1) detectou a presença de Leishmania em 24 amostras do total de 28 pacientes. A PCR-RFLP discriminou L. (V.) braziliensis como agente etiológico em 7 amostras, enquanto que L. (L.) amazonensis foi identificada em 14 amostras. Em nosso estudo, a maioria dos pacientes acometidos foram homens (N=20/71,43%), com faixa etária entre 18 a 35 anos (N=18/64,29%), de baixo nível de escolaridade (N=16/57,14%), residentes da zona rural (N=18/64,29%) e desempenhando a ocupação de garimpeiro (N=11/39,29%). A maior parte dos casos foi classificada como autóctone (N=17/60,71%), com a maior ocorrência de L. (L.) amazonensis no município de Pedro do Rosário (N=5/17,87%), seguido dos casos importados da Guiana Francesa que apresentaram ambas as espécies. Na avaliação da PCR ITS1, a positividade foi de 85,71%, e o índice Kappa foi de 0,22 demonstrando relação fraca entre o teste molecular utilizado e o padrão-ouro, sendo a PCR a técnica mais sensível (90,48%). Este estudo fornece dados epidemiológicos relevantes sobre Leishmania em Pinheiro/MA e regiões vizinhas, contribuindo para estratégias eficazes de controle da doença e, ainda, destaca a importância de testes moleculares como complementares ao diagnóstico.__ABSTRACT: American cutaneous leishmaniasis (ATL) is the most common form of leishmaniasis in Brazil, with Leishmania (Viannia) braziliensis being the main causative species, with the additional presence of the species L. (Leishmania) amazonensis. The appropriate diagnosis of ATL requires the evaluation of clinical and epidemiological parameters, followed by laboratory tests for confirmation. In this context, molecular techniques stand out due to their high sensitivity and specificity. PCR-RFLP emerges as a pre-eminent method in the molecular diagnosis of Leishmania species, using specific molecular targets for species discrimination. Therefore, the main objective of this work was to determine the species of Leishmania in samples from patients with suspected ATL treated at the Pinheiro/MA Health Regional, as well as to carry out the clinical-epidemiological characterization of the studied population through comparative analysis of qualitative data. (sex, age, education, among others) and geographic distribution data of all Leishmania species identified in the study to determine autochthonous and imported cases. Furthermore, the correlation between the molecular technique (PCR) used and the direct parasitological test, considered the gold standard, was also evaluated. PCR of the internal transcribed spacer region-1 (ITS1) detected the presence of Leishmania in 24 samples from a total of 28 patients. PCR-RFLP discriminated L. (V.) braziliensis as the etiological agent in 7 samples, while L. (L.) amazonensis was identified in 14 samples. In our study, the majority of affected patients were men (N=20/71.43%), aged between 18 and 35 years (N=18/64.29%), with a low level of education (N=16 /57.14%), residing in rural areas (N=18/64.29%) and working as a miner (N=11/39.29%). Most cases were classified as autochthonous (N=17/60.71%), with the highest occurrence of L. (L.) amazonensis in the municipality of Pedro do Rosário (N=5/17.87%), followed by of cases imported from French Guiana that presented both species. In the ITS1 PCR evaluation, positivity was 85.71%, and the Kappa index was 0.22, demonstrating a weak relationship between the molecular test used and the gold standard, with PCR being the most sensitive technique (90.48%). This study provides relevant epidemiological data on Leishmania in Pinheiro/MA and neighboring regions, contributing to effective disease control strategies and also highlights the importance of molecular tests as complementary to diagnosis.